Polarité du champ électrique

Bonne réponse. L’ADN migre vers le pôle +

Effectivement, l’ADN migre en direction du pôle positif. La raison est simple : l’ADN est chargé négativement en raison de son squelette composé de groupements phosphates (chargés négativement). Dans un champ électrique, une molécule chargée migrera toujours vers le pôle de charge opposé.

 

 

Mauvaise réponse. L’ADN migre vers le pôle –

Et malheureusement non, vous venez de perdre vos échantillons car ceux-ci sont sortis du gel (en migrant du mauvais côté), il va falloir tout recommencer (si un jour vous faites des électrophorèses, pensez toujours à vérifier vos branchements, le code couleur couramment utilisé n’est pas toujours respecté par vos collègues... alors ce n’est pas parce que le fil est noir ou parce que «–» est écrit dessus, qu’il s’agit nécessairement du pôle – ). Vers la bonne réponse.

 

Question : Qu’en est-il pour les protéines ?

 

 

Bien! Nous arrivons bientôt au terme de cette expérience. Après 1 heure de migration à 90 Volts, vos ADN ont migré plus ou moins rapidement en fonction de leur taille. A l’aide du marqueur que vous avez chargé à côté, vous allez pouvoir estimer la taille de vos fragments.

L’ADN n’est pas visible à l’oeil nu. Pour le visualiser dans le gel, il va falloir le colorer. Il existe plusieurs méthodes pour cela, mais la plus efficace est l’utilisation du Bromure d’Ethidium (voir la structure de la molécule). Cette molécule s’intercale entre les bases de l’ADN. Elle a la particularité de devenir fluorescente lorsqu’on l’irradie avec des UV. Son défaut principal est lié à sa propriété de s’intercaler entre les bases de l’ADN : elle est mutagène.

Vous baignez votre gel dans une solution de Bromure d’Ethidium. Après 20 minutes de «coloration», vous allez pouvoir visualiser votre ADN sous une lampe UV, et découper la zone du gel qui contient des fragments de 3 à 12kb.

 

Voici une photo d'un exemple d'un gel sous UV et une représentation (remaniée pour faciliter la compréhension) d'une digestion d'un plasmide par BamHI et Sau3A et de l'ADN d'un champignon par Sau3A.

Choisissez les instruments dont vous allez avoir besoin pour cette opération : (cliquez sur l’image de votre choix)

Scalpel + pince + tube.

Scalpel + pince + tube ; gants et blouse ; compteur Geiger.

Scalpel + pince + tube ; lunettes (visière) de protection.

Scalpel + pince + tube ; gants et blouse ; lunettes (visière) de protection.

 

B. Emery. 21.11.05